找出導(dǎo)致精子制動(dòng)和死亡的原因

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  許多不孕不育癥的原因都是在男方的身上。而因?yàn)榫拥?strong>問題造成不孕不育是其中常見的病因。

  抗精子抗體就是精子的一個(gè)“毒物”。他讓精子的質(zhì)量變差,導(dǎo)致精子不能和卵子結(jié)合,孕育出生命。

  抗精子抗體與精子結(jié)合后,在補(bǔ)體參與下,可導(dǎo)致精子制動(dòng)和死亡,利用臺(tái)盼藍(lán)或伊紅Y 等染料使死精子染色,間接驗(yàn)證血清或分泌液中是否有制動(dòng)精子的抗體存在。

  一、臺(tái)盼藍(lán)染色法

  【準(zhǔn)備】

  1、待檢血清的分離和滅活補(bǔ)體。

  2、AB血型人血清(補(bǔ)體)制備。

  3、2%臺(tái)盼藍(lán)液配制(用蒸餾水)。

  4、臺(tái)盼藍(lán)-生理鹽水溶液配制:取適量生理鹽水,加等體積2%臺(tái)盼藍(lán)水溶液,混勻即可。


找出導(dǎo)致精子制動(dòng)和死亡的原因

  5、配制0.01 mol/L,pH 7.4 PBS溶液。

  【方法】

  1、取正常新鮮精液[精子濃度為(40~ 100)×106/mL]用pH7.4 PBS作1∶10稀釋,以500r/min 30min離心洗滌一次,棄去上清,沉渣用PBS調(diào)整精子濃度為100×106/mL 的精子懸液。

  2、在小試管內(nèi)加入1滴待檢血清,1滴精子懸液和 2滴補(bǔ)體血清。置37℃ 孵育,并于30min、60min分別追加2滴補(bǔ)體血清,直至90min后加入 1滴臺(tái)盼藍(lán)生理鹽水溶液,繼續(xù)孵育 60min,取出小試管,以500r/min,30min離心,棄去上清,將沉渣涂片,待干燥后鏡下觀察。以陰性血清作對(duì)照組,以同樣條件和方法處理

  3、計(jì)數(shù):對(duì)照組:記錄數(shù)至100個(gè)無染色精子(活精子)時(shí)所需的總精子數(shù)(含100個(gè)無染色精子加一定數(shù)量染色的死精子)。實(shí)驗(yàn)組:記錄對(duì)照組相應(yīng)的總精子數(shù),把其中所含的無染色精子(活精子)數(shù)作X。將100-X所得的數(shù)目,即為被檢血致死的精子數(shù),這個(gè)數(shù)目稱為精子毒性指數(shù)(STI)。

  【判斷】

  STI>25時(shí),P≤0.01,判為陽(yáng)性。STI在 15~ 20之間,判為可疑。STI<15時(shí),判為陰性。本法所得陽(yáng)性率與精子制動(dòng)試驗(yàn)的陽(yáng)性率較為一致。

  

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